بازگشت به دانشنامه ←
محیط کشت RPMI 1640 چیست؟
ملزومات و مواد مصرفی۱۲ دقیقه مطالعه۱۱ بازدید

محیط کشت RPMI 1640 چیست؟

محیط کشت RPMI 1640 یکی از پرکاربردترین محیط‌های کشت سلولی است که به‌ویژه برای کشت لنفوسیت‌ها، سلول‌های خونی و بسیاری از رده‌های سلولی پستانداران استفاده می‌شود. این محیط حاوی ترکیبی از نمک‌های معدنی، اسیدهای آمینه، ویتامین‌ها، گلوکز و سایر مواد موردنیاز سلول است. در آزمایشگاه‌های سیتوژنتیک، RPMI 1640 یکی از محیط‌های رایج برای کشت لنفوسیت‌های خون محیطی پیش از انجام کاریوتایپ است. نوع فرمولاسیون، وجود یا عدم وجود L-Glutamine و Phenol Red، مکمل‌های مورد استفاده، شرایط نگهداری و کیفیت محصول می‌توانند بر رشد سلول و نتیجه نهایی آزمایش تأثیر بگذارند.

ملزومات و مواد مصرفی

محیط کشت RPMI 1640 چیست؟

ترکیبات، کاربردها و نقش آن در کشت سلول و کاریوتایپ

پاسخ کوتاه
  • RPMI 1640 یکی از پرکاربردترین محیط‌های کشت برای سلول‌های پستانداران و به‌ویژه لنفوسیت‌ها است.
  • در سیتوژنتیک از RPMI 1640 برای کشت لنفوسیت‌های خون محیطی پیش از کاریوتایپ استفاده می‌شود.
  • این محیط حاوی نمک‌ها، اسیدهای آمینه، ویتامین‌ها و گلوکز موردنیاز سلول است.
  • RPMI 1640 معمولاً به مکمل‌هایی مانند Serum نیاز دارد و فرمولاسیون‌های مختلف آن ممکن است حاوی یا فاقد L-Glutamine باشند.
  • هنگام انتخاب RPMI باید فرمولاسیون، وجود Phenol Red و L-Glutamine، شرایط نگهداری، تاریخ انقضا و سازگاری آن با پروتکل آزمایشگاه بررسی شود.

محیط کشت RPMI 1640 چیست؟

RPMI 1640 یک Cell Culture Medium است که برای فراهم کردن مواد مغذی و شرایط شیمیایی موردنیاز رشد و نگهداری سلول‌ها در محیط آزمایشگاهی طراحی شده است.

نام RPMI از Roswell Park Memorial Institute گرفته شده است؛ جایی که خانواده‌ای از محیط‌های RPMI توسعه یافتند.

RPMI 1640 در ابتدا برای کشت سلول‌های خونی و لنفوئیدی توسعه یافت و امروزه یکی از شناخته‌شده‌ترین محیط‌های کشت سلولی در جهان محسوب می‌شود.

این محیط به‌طور گسترده در:

  • Cytogenetics
  • Immunology
  • Hematology
  • Cancer Research
  • Cell Biology
  • Molecular Biology

استفاده می‌شود.

محیط کشت RPMI 1640
RPMI 1640؛ محیط کشت پرکاربرد برای لنفوسیت‌ها، سلول‌های خونی و کاربردهای سیتوژنتیک

RPMI 1640 چگونه عمل می‌کند؟

سلول‌ها خارج از بدن برای زنده ماندن و تکثیر به مجموعه‌ای از مواد مغذی و شرایط فیزیکوشیمیایی مناسب نیاز دارند.

RPMI 1640 محیطی ایجاد می‌کند که مواد موردنیاز سلول را در اختیار آن قرار می‌دهد.

این مواد شامل ترکیبی از:

Amino Acids
Vitamins
Inorganic Salts
Glucose
Buffering Components

هستند.

با این حال RPMI به‌تنهایی الزاماً تمام نیازهای هر نوع سلول را تأمین نمی‌کند و بسته به کاربرد، مکمل‌های دیگری نیز به آن اضافه می‌شوند.

ترکیبات اصلی RPMI 1640 چیست؟

فرمولاسیون دقیق محصولات تجاری ممکن است متفاوت باشد، اما RPMI 1640 به‌طور کلی شامل گروه‌های زیر است:

اسیدهای آمینه
اسیدهای آمینه برای سنتز پروتئین و بسیاری از فرآیندهای متابولیک سلول ضروری هستند.
ویتامین‌ها
ویتامین‌ها به‌عنوان Cofactor در بسیاری از واکنش‌های سلولی نقش دارند.
نمک‌های معدنی
نمک‌ها به حفظ Osmotic Balance، Membrane Potential و Ion Homeostasis کمک می‌کنند.
گلوکز
گلوکز یکی از منابع اصلی انرژی سلول است.
سیستم بافری
ترکیبات بافری به کنترل pH محیط کمک می‌کنند.

RPMI 1640 چه کاربردی در کاریوتایپ دارد؟

یکی از مهم‌ترین کاربردهای RPMI 1640 در آزمایشگاه‌های ژنتیک، کشت لنفوسیت‌های خون محیطی برای کاریوتایپ است.

بیشتر لنفوسیت‌های خون محیطی در زمان نمونه‌گیری فعالانه تقسیم نمی‌شوند.

برای تهیه متافاز باید شرایطی فراهم شود که لنفوسیت‌ها:

۱
زنده بمانند
۲
فعال شوند
۳
وارد چرخه سلولی شوند
۴
تکثیر کنند
۵
وارد میتوز شوند

RPMI 1640 محیط پایه مناسبی برای این فرآیند فراهم می‌کند.

نقش RPMI 1640 در کشت لنفوسیت

در کاریوتایپ خون محیطی، RPMI معمولاً بخشی از یک سیستم کامل کشت است.

بسته به پروتکل آزمایشگاه، محیط کشت می‌تواند شامل:

RPMI 1640
Serum
PHA
L-Glutamine در صورت نیاز
Antibiotics در صورت استفاده

باشد.

در این سیستم، PHA نقش Mitogen را دارد و لنفوسیت‌های T را برای ورود به چرخه سلولی تحریک می‌کند.

RPMI نیز محیط مناسب برای زنده ماندن و تکثیر سلول‌ها را فراهم می‌کند.

مراحل کلی استفاده از RPMI در کاریوتایپ

فرآیند کلی را می‌توان به شکل زیر خلاصه کرد:

Peripheral Blood → RPMI 1640 + Supplements + PHA → Cell Culture → Colcemid → KCl → Fixation → Slide Preparation → Trypsin → Giemsa → Microscopy

بنابراین RPMI یکی از اولین مواد مورد استفاده در فرآیند کشت کروموزومی است.

کیفیت محیط کشت می‌تواند روی مراحل بعدی و در نهایت تعداد متافازهای قابل بررسی اثر بگذارد.

نقش Serum در محیط RPMI چیست؟

RPMI یک Basal Medium است و در بسیاری از کاربردها همراه با Serum استفاده می‌شود.

یکی از رایج‌ترین مکمل‌ها Fetal Bovine Serum یا FBS است.

Serum می‌تواند ترکیبات مختلفی مانند:

Growth Factors
Hormones
Attachment Factors
Proteins
Lipids

را در اختیار سلول قرار دهد.

مقدار Serum مورد استفاده به نوع سلول و پروتکل بستگی دارد.

آیا RPMI همیشه به FBS نیاز دارد؟

خیر.

این موضوع کاملاً به نوع سلول و سیستم کشت بستگی دارد.

برخی کشت‌ها با Serum انجام می‌شوند، در حالی که برای برخی کاربردها محیط‌های:

Serum-Free
Reduced-Serum
Chemically Defined

استفاده می‌شوند.

در کاریوتایپ روتین خون محیطی نیز باید فرمولاسیون دقیق محیط بر اساس پروتکل معتبرشده آزمایشگاه انتخاب شود.

L-Glutamine چیست و چه ارتباطی با RPMI دارد؟

L-Glutamine یک اسید آمینه مهم در متابولیسم بسیاری از سلول‌های در حال رشد است.

برخی محصولات RPMI 1640 حاوی L-Glutamine هستند و برخی بدون آن عرضه می‌شوند.

این تفاوت هنگام خرید بسیار مهم است.

اگر پروتکل آزمایشگاه به L-Glutamine نیاز داشته باشد، باید بررسی شود که:

آیا در محیط آماده وجود دارد یا باید جداگانه اضافه شود؟

همچنین برخی محصولات از فرم‌های پایدارتر گلوتامین استفاده می‌کنند.

Phenol Red در RPMI چیست؟

بسیاری از فرمولاسیون‌های RPMI حاوی Phenol Red هستند.

Phenol Red یک pH Indicator است و تغییرات pH محیط را به‌صورت تغییر رنگ نشان می‌دهد.

به‌طور کلی تغییر رنگ محسوس محیط می‌تواند نشانه‌ای از تغییر شرایط pH باشد.

اما رنگ محیط نباید به‌تنهایی برای تعیین دقیق pH استفاده شود.

RPMI بدون Phenol Red چیست؟

برای برخی آزمایش‌ها، وجود Phenol Red ممکن است نامطلوب باشد.

به همین دلیل RPMI 1640 بدون Phenol Red نیز تولید می‌شود.

این نوع محیط ممکن است در برخی کاربردهای:

Fluorescence-based assays
Hormone-related studies
Optical measurements

مناسب‌تر باشد.

بنابراین وجود یا عدم وجود Phenol Red یکی از مشخصاتی است که هنگام خرید RPMI باید بررسی شود.

RPMI با HEPES چیست؟

برخی فرمولاسیون‌های RPMI حاوی HEPES هستند.

HEPES یک Buffer است که می‌تواند به پایداری pH در برخی شرایط کشت کمک کند.

اما وجود HEPES برای همه کاربردها ضروری نیست.

هنگام خرید باید مشخص شود که پروتکل آزمایشگاه نیاز به:

RPMI with HEPES
RPMI without HEPES

دارد.

تفاوت RPMI 1640 و DMEM چیست؟

RPMI و DMEM هر دو از معروف‌ترین محیط‌های کشت سلولی هستند، اما فرمولاسیون و کاربردهای رایج آن‌ها متفاوت است.

ویژگیRPMI 1640DMEM
کاربرد شناخته‌شدهلنفوسیت‌ها و سلول‌های خونیبسیاری از سلول‌های چسبنده
Cytogenetics خون محیطیبسیار رایجمعمولاً انتخاب اصلی نیست
Cell Cultureبسیار رایجبسیار رایج
فرمولاسیونمخصوص RPMIمبتنی بر MEM با ترکیبات بیشتر
انواع مختلفدارددارد
نیاز به Supplementوابسته به سلولوابسته به سلول

انتخاب بین RPMI و DMEM باید بر اساس نوع سلول انجام شود، نه صرفاً موجود بودن محیط در آزمایشگاه.

RPMI در چه سلول‌هایی استفاده می‌شود؟

RPMI 1640 در کشت طیف گسترده‌ای از سلول‌ها کاربرد دارد، از جمله:

Lymphocytes
PBMCs
برخی Leukemia Cell Lines
برخی Lymphoma Cell Lines
Hybridoma Cells
برخی سلول‌های سرطانی
سایر سلول‌های پستانداران بر اساس پروتکل

با این حال هر Cell Line نیازهای اختصاصی خود را دارد و باید توصیه منبع معتبر همان رده سلولی بررسی شود.

کاربرد RPMI در تحقیقات سرطان

RPMI یکی از محیط‌های پرکاربرد برای کشت برخی Cell Lineهای سرطانی است.

به‌خصوص تعدادی از رده‌های:

Leukemia
Lymphoma
Myeloma

با RPMI کشت داده می‌شوند.

همچنین برای برخی رده‌های Solid Tumor نیز RPMI توصیه شده است.

کاربرد RPMI در ایمنی‌شناسی

RPMI در Immunology کاربرد بسیار گسترده‌ای دارد.

برای مثال در کشت:

PBMC
T Cells
B Cells
برخی Immune Cell Lines

از این محیط استفاده می‌شود.

این ویژگی ارتباط مستقیمی با کاربرد تاریخی RPMI برای سلول‌های لنفوئیدی دارد.

RPMI آماده یا پودری؟

RPMI ممکن است در شکل‌های مختلف عرضه شود.

محیط مایع آماده

مزیت اصلی آن سهولت استفاده و کاهش مراحل آماده‌سازی است.

محیط پودری

برای تهیه حجم‌های بیشتر قابل استفاده است، اما آماده‌سازی آن نیازمند کنترل دقیق‌تر شرایط و رعایت پروتکل سازنده است.

انتخاب میان این دو به:

حجم مصرف
امکانات آزمایشگاه
پروتکل
هزینه
شرایط نگهداری

بستگی دارد.

عوامل مؤثر بر کیفیت RPMI

موارد مختلفی می‌توانند روی عملکرد محیط کشت تأثیر بگذارند:

فرمولاسیون
کیفیت مواد اولیه
شرایط حمل
دمای نگهداری
تاریخ انقضا
مدت زمان پس از باز شدن
مکمل‌های اضافه‌شده
آلودگی میکروبی
pH
Osmolality
دفعات تغییر دمای محیط

به همین دلیل مدیریت صحیح محیط کشت بعد از خرید نیز اهمیت زیادی دارد.

آلودگی محیط کشت

یکی از مهم‌ترین مشکلات در Cell Culture، آلودگی است.

آلودگی ممکن است ناشی از:

Bacteria
Fungi
Yeast
Mycoplasma

باشد.

برخی آلودگی‌ها به‌وضوح قابل مشاهده هستند، اما Mycoplasma می‌تواند بدون ایجاد کدورت واضح در محیط حضور داشته باشد.

به همین دلیل رعایت تکنیک Aseptic اهمیت زیادی دارد.

مزایا و محدودیت‌ها

✅ مزایا
  • کاربرد گسترده در کشت سلولی
  • بسیار مناسب برای بسیاری از سلول‌های لنفوئیدی
  • کاربرد رایج در کشت خون محیطی برای کاریوتایپ
  • دسترسی به فرمولاسیون‌های مختلف
  • امکان استفاده در Immunology و Cancer Research
  • عرضه توسط شرکت‌های متعدد
  • امکان تهیه به شکل مایع یا پودر
❌ محدودیت‌ها
  • برای تمام Cell Lineها بهترین محیط نیست.
  • در بسیاری از کاربردها به Supplement نیاز دارد.
  • فرمولاسیون برندهای مختلف ممکن است متفاوت باشد.
  • شرایط نامناسب نگهداری می‌تواند کیفیت محیط را کاهش دهد.
  • آلودگی میکروبی می‌تواند کل کشت را از بین ببرد.
  • وجود یا عدم وجود L-Glutamine، HEPES و Phenol Red باید هنگام خرید بررسی شود.

شرایط نگهداری RPMI 1640

شرایط دقیق نگهداری باید بر اساس دستورالعمل همان محصول تعیین شود.

موارد مهم شامل:

دمای نگهداری
محافظت از نور در صورت توصیه سازنده
تاریخ انقضا
شرایط پس از باز شدن
جلوگیری از آلودگی
شرایط حمل

است.

محصولات مایع و پودری ممکن است شرایط نگهداری متفاوتی داشته باشند.

برندهای مطرح RPMI 1640

برخی از تولیدکنندگان شناخته‌شده محیط‌های کشت سلولی عبارت‌اند از:

Gibco / Thermo Fisher Scientific
Merck / Sigma-Aldrich
Cytiva / HyClone
Lonza
Corning
Sartorius
PAN-Biotech
Capricorn Scientific

محصولات این شرکت‌ها ممکن است از نظر ترکیبات همراه و فرمولاسیون متفاوت باشند.

هنگام انتخاب و خرید RPMI 1640 به چه نکاتی توجه کنیم؟

هنگام خرید فقط عبارت «RPMI 1640» کافی نیست.

بهتر است مشخصات کامل محصول بررسی شود:

With or Without L-Glutamine
With or Without Phenol Red
With or Without HEPES
Sodium Bicarbonate
Liquid یا Powder
Sterility
حجم بسته‌بندی
برند
Catalog Number
Lot Number
تاریخ انقضا
شرایط حمل و نگهداری

این موضوع به‌خصوص هنگام مقایسه قیمت تأمین‌کنندگان اهمیت دارد، زیرا دو محصول با عنوان RPMI 1640 الزاماً فرمولاسیون یکسانی ندارند.

وکتور چگونه می‌تواند در تأمین RPMI 1640 کمک کند؟

RPMI 1640 نمونه خوبی از محصولاتی است که در زمان استعلام، صرفاً مقایسه قیمت آن‌ها کافی نیست.

در وکتور می‌توانید هنگام ثبت درخواست خرید مشخص کنید که به چه فرمولاسیونی نیاز دارید؛ برای مثال:

RPMI 1640 + L-Glutamine + Phenol Red

یا شماره کاتالوگ محصول موردنظر را ثبت کنید.

سپس پیشنهاد تأمین‌کنندگان مختلف را از نظر:

برند
فرمولاسیون
حجم
قیمت
موجودی
تاریخ انقضا
زمان تحویل

مقایسه کنید.

همچنین می‌توان مواد مکمل مانند FBS، PHA، Colcemid، L-Glutamine و Penicillin-Streptomycin را نیز هم‌زمان استعلام کرد.

💡 تجربه عملی

یکی از اشتباهاتی که هنگام سفارش محیط کشت ممکن است رخ دهد، خرید محصول تنها بر اساس نام RPMI 1640 است.

دو بطری RPMI از یک برند یا دو برند مختلف ممکن است از نظر وجود:

L-Glutamine، HEPES یا Phenol Red

متفاوت باشند.

این تفاوت می‌تواند باعث شود محیط خریداری‌شده دقیقاً همان محصول مورد استفاده در پروتکل آزمایشگاه نباشد.

به همین دلیل برای مواد Cell Culture بهتر است Catalog Number نیز در سیستم خرید آزمایشگاه ثبت شود.

از طرف دیگر، اگر بعد از تغییر Lot یا برند RPMI کاهش تکرارشونده‌ای در رشد کشت‌ها مشاهده شود، بررسی محیط جدید در کنار Serum، PHA، شرایط انکوباتور و سایر عوامل منطقی است.

سؤالات متداول

RPMI 1640 چیست؟
یک محیط کشت سلولی است که مواد مغذی و شرایط شیمیایی لازم برای رشد بسیاری از سلول‌های پستانداران را فراهم می‌کند.
RPMI مخفف چیست؟
نام آن از Roswell Park Memorial Institute گرفته شده است.
RPMI در کاریوتایپ چه کاربردی دارد؟
یکی از محیط‌های رایج برای کشت لنفوسیت‌های خون محیطی پیش از تهیه متافاز و کاریوتایپ است.
آیا RPMI به‌تنهایی برای کشت کافی است؟
در بسیاری از کاربردها خیر و باید مکمل‌هایی مانند Serum یا سایر ترکیبات موردنیاز سلول به آن اضافه شوند.
آیا RPMI حاوی L-Glutamine است؟
بعضی فرمولاسیون‌ها حاوی آن هستند و برخی فاقد آن؛ بنابراین باید مشخصات محصول بررسی شود.
Phenol Red در RPMI چه کاری انجام می‌دهد؟
به‌عنوان pH Indicator عمل می‌کند و تغییرات pH می‌تواند باعث تغییر رنگ محیط شود.
تفاوت RPMI و DMEM چیست؟
هر دو محیط کشت سلولی هستند، اما ترکیبات و کاربردهای رایج متفاوتی دارند. RPMI به‌ویژه برای بسیاری از سلول‌های لنفوئیدی شناخته شده است.
آیا RPMI برای PBMC مناسب است؟
بله، RPMI 1640 یکی از محیط‌های بسیار رایج برای کشت PBMC است، البته مکمل‌ها و شرایط دقیق به پروتکل بستگی دارند.
آیا تغییر رنگ RPMI همیشه نشانه آلودگی است؟
خیر. تغییر رنگ می‌تواند ناشی از تغییر pH باشد و دلایل مختلفی داشته باشد. برای تشخیص آلودگی باید سایر شواهد نیز بررسی شوند.
هنگام خرید RPMI چه چیزی مهم‌تر است؟
علاوه بر برند و قیمت، باید فرمولاسیون دقیق، L-Glutamine، Phenol Red، HEPES، حجم، تاریخ انقضا و شماره کاتالوگ بررسی شوند.

منابع

  1. Moore GE, Gerner RE, Franklin HA. Culture of Normal Human Leukocytes. JAMA
  2. Freshney RI. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications
  3. Arsham MS, Barch MJ, Lawce HJ. The AGT Cytogenetics Laboratory Manual
  4. ATCC. Animal Cell Culture Guide
  5. Thermo Fisher Scientific / Gibco. RPMI 1640 Technical Documentation
  6. Merck / Sigma-Aldrich. RPMI 1640 Technical Documentation
  7. Cytiva / HyClone. Cell Culture Media Technical Documentation
  8. Current Protocols in Cell Biology
نماد اعتماد الکترونیکیپرداخت امن آقای پرداخت

برای استفاده از مطالب وکتور داشتن هدف تجاری، و ذکر منبع، کافیست

تمام حقوق این وبسایت نیز برای شرکت تامین دیجیتال پارسه (پلتفرم مناقصه آنلاین وکتور) می‌باشد.

VECTOR